Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 2.2.31 .-1
Приготовление разделительного геля
Компоненты раствора Объемы компонента (мл) на 1 кассету геля вместимостью
5мл 10мл 15мл 20мл 25мл 30мл 40мл 50мл
6% акриламид
Вода Р 2,6 5,3 7,9 10,6 13,2 15,9 21,2 26,5
Раствор акриламида (1) 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 8,0 10,0
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,004 0,008 0,012 0,016 0,02 0,024 0,032 0,04
8% акриламид
Вода Р 2,3 4,6 6,9 9,3 11,5 13,9 18,5 23,2
Раствор акриламида (1) 1,3 2,7 4,0 5,3 6,7 8,0 10,7 13,3
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,003 0,006 0,009 0,012 0,015 0,018 0,024 0,03
10% акриламид
Вода Р 1,9 4,0 5,9 7,9 9,9 11,9 15,9 19,8
Раствор акриламида (1) 1,7 3,3 5,0 6,7 8,3 10,0 13,3 16,7
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
12% акриламид
Вода Р 1,6 3,3 4,9 6,6 8,2 9,9 13,2 16,5
Раствор акриламида (1) 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
14% акриламид
Вода Р 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8
Раствор акриламида (1) 2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 1,9 18,6 23,2
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,2 2,5 3,6 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
15% акриламид
Вода Р 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5
Раствор акриламида (1) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0
1.5М Трис (рН 8.8) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
Раствор 100 г/л ДСН (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
Раствор 100 г/л АПС (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ТЕМЭД (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
(1) Раствор акриламида: 30% раствор акриламида/бисакриламида (29:1) Р.
(2) 1.5М Трис (рН 8.8): 1.5М буферный раствор трис-гидрохлорида рН 8.8 Р.
(3) Раствор 100 г/л ДСН: раствор 100 г/л натрия додецилсульфоната Р.
(4) Раствор 100 г/л АПС: раствор 100 г/л аммония персульфата Р. Аммония персульфат
доставляет свободные радикалы, которые ускоряют полимеризацию акриламида и
бисакриламида. Поскольку раствор аммония персульфата разлагается, следует готовить
еженедельно свежие растворы
(5) ТЕМЭД: тетраметилэтилендиамин Р.
Приготовление концентрирующего геля. После завершения полимеризации (около 30 минут) сливают изобутанол и промывают верхнюю поверхность геля несколько раз водой для удаления нанесенного изобутанола и каких-либо неполимеризованных излишек акриламида. Удаляют как можно больше жидкости с поверхности геля при помощи кончика бумажной салфетки.
